الرئيسية
أحدث الصور
من طرف زراعة الكائنات الحية الدقيقة
Cultivation of microorganisms
Cultivation of microorganisms
توجد الكائنات الحية الدقيقة في الطبيعة, في مجتمعات خليطه من أنواع عديدة متباينة, وذلك فان ما توصلنا إليه من معلومات في الميكروبيولوجى, جاء من دراسة الأنواع المعزولة النامية في وسط خال من أي تلوث بالكائنات الأخرى. مثل هذه الطرق من الدراسة الفريدة من نوعها لا تستعمل عادة في دراسة النباتات والحيوانات الراقية, ولكنها خاصة فقط بالدراسات المتعلقة بعالم الميكروبات.
تتطلب الكائنات الحية الدقيقة, مثل كل الكائنات الحية وسطا مناسبا لتنمو فيه. أولا: يجب أن تحتوى البيئة المزرعية (Culture medium) على العناصر الغذائية اللازمة لنمو المزرعة الميكروبية.
ثانيا: يجب ان توفر هذه البيئة في نفس الوقت, وسطا مناسبا من حيث الرقم الايدروجينى, الضغط الاسموزى، الأكسجين,.......وغيرها من العوامل. وإذا ما فكرنا في عدد من المواد المختلفة التي تستطيع الميكروبات أن تتلفها, فانه سيتبين لنا أن مواد عديدة مختلفة تصلح كبيئة مزرعية.
وتقسم البيئات المزرعية بشكل عام إلى نوعين:
1. بيئات سائلة (مرق, بويون)(Liquid or Broth media) .
2. بيئات صلبة قابلة للإسالة(Solid media) .
ونظرا لان معظم دراساتنا المعملية ستتم باستعمال مزرعة نقية من الميكروبات (على نوع واحد Single species ) من الكائنات الحية الدقيقة, فانه يجب أن نكون قادرين على تعقيم البيئة والاحتفاظ بها في صورة معقمة خالية من أي نوع من أنواع الكائنات.
كما يجب أن نكون قادرين على تلقيح هذه البيئات المعقمة بمزرعة نقية للميكروب دون حدوث أي تلوث من الخارج. وتعرف الخطوة الأخيرة باسم طريقة منع التلوث (Aseptic technique) .
و لأن أي بيئة بعد تحضيرها تحتوى على كائنات دقيقة آتية من المكونات الداخلة في تركيب البيئة أو من سطوح الأواني والأدوات المستعملة, لذلك فان البيئة يجب أن تعقم , فتعامل بالحرارة أو بوسائل أخرى مناسبة لإبادة كل الميكروبات الموجودة بها, وإلا فان البيئة ستحتوى على خليط من الكائنات الدقيقة. وقبل إجراء عملية التعقيم فان الأنابيب المحتوية على البيئة, يجب أن تغطى بسدادات من القطن, أو بغطاء مناسب من البلاستيك أو المعدن. حيث يمنع الغطاء دخول كائنات جديدة تلوث البيئة, وفى نفس الوقت يسمح بتبادل الهواء, أو الغازات.
ولكي تنمو المزرعة البكتيرية في البيئة المعقمة, فان عددا من خلايا البكتيريا يسمى باللقاح (Inoculum) ينقل إلى البيئة بواسطة إبرة التلقيح ذات العقدة (Inoculating Loop), مع اخذ الاحتياطات المناسبة للمحافظة على نقاء المزرعة.
وعند عملية التلقيح, يجب أن تسخن الإبرة المستعملة في نقل الميكروبات على الفور قبل وبعد النقل, وذلك بواسطة اللهب لدرجة الاحمرار. التسخين لدرجة الاحمرار سوف يقتل كل الكائنات الحية الدقيقة الموجودة على سطح الإبرة. مع مراعاة أن تمسك في وضع رأسي لتسخين الجزء السفلى من مقبضها.
وأثناء عملية نقل اللقاح, يتم مسك الأنبوبة باليد اليسرى, وبواسطة أصابع اليد اليمنى ينزع غطاء الأنبوبة, مع الحذر من إلقاء الغطاء, أو وضعه على المنضدة.
و تكون الأنبوبة في وضع أفقي تقريبا ولا تترك مفتوحة مدة أكثر من اللازم. ويجب أن تمرر فوهات الأنابيب التي أخذت منها المزرعة, أو التي نقلت إليها الميكروبات في لهب بنزن على الفور قبل وبعد إدخال الإبرة و إخراجها, ثم تغطى الأنابيب وتوضع في حامل الأنابيب.
ونظرا لان اغلب أعمال الميكروبيولوجيين تتم من خلال استعمال مزارع نقية, لذلك فانه يجب عليك أن تقدرى أهمية الطرق المستعملة في التلقيح, الأمر الذي يحتم عليك أن تتقني هذه الطرق مبكرا.
وعقب إجراء عملية التلقيح.. تحفظ المزرعة البكتيرية, أو تحضن في وسط مناسب للنمو والمقصود هنا بالنمو (Growth) هو: زيادة أعداد الخلايا من خلية واحدة, أو من عدة خلايا قليلة, وتصبح كتلة الخلايا الجديدة النامية مرئية للعين المجردة كتعكير في البيئة السائلة, أو كمستعمرة (Colony) في البيئة الصلبة. ويستخدم مظهر النمو كوسيلة للتمييز بين أنواع الميكروبات.
إن الطريقة السهلة الشائعة لتحضير البيئة الصلبة هي إضافة مادة تصلب القوام (Solidifying agent) إلى البيئة السائلة, فتتصلب البيئة عندما تبرد, ومن أكثر المواد المصلبة للبيئة استعمالا, هي مادة الآجار, وهى مادة تستخرج من الطحالب البحرية, وتضاف إلى البيئة قبل عملية التعقيم. وتحفظ البيئة الصلبة في أنابيب أو دوارق مغلقة.
دراسة الصفات المزرعية لمستعمرات بكتيرية مختلفة معزولة من عدة مصادر
Characterization of different bacterial colonies isolated from different sources
عند نمو وتكاثر خلية واحدة على بيئة مغذية صلبة ينتج المجموعة البكتيرية أو المستعمرة. وتختلف مجاميع البكتيريا في الشكل, والتركيب, الحافة, الارتفاع, اللون, القوام, وذلك له أهمية في دراسة الخواص المزرعية للميكروبات للتعرف عليها. كما يستفاد من تكون المجاميع عزل البكتيريا بصورة نقية.
الأدوات والمواد المستخدمة:
أطباق بتري المستعملة في التدريب السابق, عدسة يدوية, أو بالميكروسكوب العادي.
طريقة العمل PROCEDURE :
· اختاري بعض المجاميع التي ظهرت على الأطباق في التدريب السابق وارسمي دائرة حولها بالقلم, ثم افحصيها بواسطة العدسة الصغرى ومتبعة النظام التالي:
أ- الشكل:
ويمكن ملاحظته بالعين المجردة وقد يكون الشكل:
دائري Round غير منتظم Irregular
اهليجى Elliptical شكل الوردة Rosette shape
مغزلي Fusiform جذري Rhizoid
مثلث الأقسام Tripartite خيطي Filamentous
قوقعي, حلزوني Cochleate
ب- الحافة Edge :
وترى تحت الميكروسكوب أيضا بالعدسة الصغرى.
كاملة Entire هدبية Ciliated متموجة Undulate
مفصصة Lobate ممزقة Ragged
ج- الارتفاع High:
ويرى بوضع مستوى سطح الاجار في الطبق في مستوى النظر ويلاحظ مقدار ارتفاع المستعمرة عن سطح البيئة, وقد يكون:
مسطح Flat مرتفعRaised مدرج Terraced
محدبConvex قطرى Drop- like
د- اللون Color :
لون المستعمرة ولون البيئة من حولها.
هـ - القوامConsistency :
يمكن اختباره بواسطة إبرة التلقيح وذلك بتمريرها في المستعمرة, وقد يكون:
مائي Watery لزج Slimy ثقيلButter- like
هشة Brittle صلبة Tough
و - الشفافية Transparency :
ترى بالعين المجردة, وقد تكون:
شفافة Transparent معتمة Opaque
نصف شفافة Translucent
ز - السطح Curface:
يلاحظ إذا كانت المستعمرة لامعة أو غير لامعة.
ح - الانتشارSpread :
يلاحظ إذا كانت المجموعة منتشرة على سطح البيئة الصلبة أو محددة.
v افحصي المستعمرات التي أمامك بالعدسة اليدوية والصغرى, وارسمي نماذج لبعض المجموعات البكتيرية مع ملاحظة النقاط السابقة والتعليق عليها.
