الرئيسية
أحدث الصور
من طرف التقدير الكمي للنمو البكتيري
Quantitative measurement of bacterial growth
Quantitative measurement of bacterial growth
يعتبر التقدير الكمي للنمو البكتيري مهما جدا في معظم الدراسات التطبيقية ويعتبر أساسا في تقدير تأثير مختلف المعاملات الفيزيائية أو الكيميائية مثل درجة الحرارة و الرقم الأيدروجيني على نمو البكتيريا وتكاثرها . وهناك العديد من الطرق لحسابه ، وإحدى هذه الطرق تتم بتقدير درجة التعكيرturbidity .
تقدير درجة التعكير باستخدام جهاز قياس الطيف الضوئي
: spectrophotometer
في هذه الطريقة يجرى التقدير بقياس درجة تعكير المزرعة اعتمادا على قياس الامتصاص absorption (A)، وأساس هذه الطريقة أنه عند نمو خلايا بكتيرية في وسط غذائي سائل يزداد عددها زيادة ملحوظة مما ينشأ عنه تعكير في الوسط الغذائي ، وتتوقف درجة التعكير على نوع typeوعددnumber الخلايا البكتيرية .وفي كل حالة يراعى اختيار الطول ألموجي الضوئيwave lengthالمناسب للبكتيريا وهو الطول ألموجي الذي تكون فيه درجة امتصاص الخلايا أو المحلول أو المعلق المستعمل أكبر ما يمكن .
الغرض من التجربة :
رسم المنحنى القياسي Standard curve لبكتيريا Bacillus cereus . لتقدير العدد الكلي للخلاياtotal cell count number في المعلق البكتيري .
طريقة العمل PROCEDURE :
1- نحضر مزرعة حديثة نامية لمدة 18-24 ساعة من النوع البكتيري Bacillus cereus في البيئة المغذية السائلة Nutrient broth حوالي 50 ml في دورق زجاجي flask سعة 250 ml .
2- نجمع النمو البكتيري بواسطة عملية الطرد المركزي centrifuge عند 3000 دورة لكل دقيقة ، لمدة 15 د ونتخلص من السائل .
3- نضيف 10 ml من الماء المعقّم sterile distilled water في الأنبوب و نرج المزرعة جيدا بواسطة جهاز فورتكس Vortex mixture لكي تتوزع بها الخلايا بانتظام . ثم ننقل 1 ml بواسطة ماصّة معقّمة sterile pipette إلى أنبوبة test tub تحتوي 9 ml ماء معقّم لنحصل على تخفيف 1:10 أي 10-1 .
4- نرج المعلق المخفف بالأنبوبة ثم ننقل منها 1 ml بواسطة ماصة معقّمة أخرى إلى أنبوبة تحتوي 9 ml ماء معقم لنحصل على تخفيف 1:100 أي 10-2 .
5- نكرر الخطوة السابقة عدة مرات حتى نحصل على تخفيفات تصل إلى 10-8 . ) نراعي أن نستخدم ماصة جديدة معقمة في كل مرة( .
6- نعيين كمية الامتصاص للتخفيفات المتتالية باستخدام جهاز spectrophotometer وعند طول موجي 520 nm ، ويجب أولا وضع أنبوبة بها ماء مقطر لضبط الجهاز .
7- نرسم العلاقة بين كل تخفيف والقراءة المقابلة له ( درجة الامتصاص ) absorption .
8- ننقل 0.01 ml من كل من التخفيفات المتتالية إلى أطباق بتري معقّمة ، ونراعي تحضير طبقين من كل تخفيف . ثم نصب عليه بيئة الأجار المغذي Nutrient agar بعد إسالتها وتبريدها إلى 45ºم ، ونخلط محتويات كل طبق بتحريكه حركة دائرية ،ثم نتركه ليتصلب .
9- نضع الأطباق في الحضان وهي في وضع مقلوب على درجة 37ºْم لمدة يومين . ويراعى أن عدد المستعمرات يتراوح بين 30 -300 مستعمرة colony .
10- نحسب عدد الخلايا الحية في 1ml من المزرعة الأصلية وذلك بضرب
متوسط عدد المستعمرات في الطبق في مقلوب التخفيف المستعمل به × 10 .
11- نعوض في المنحنى السابق بعدد الخلايا المقابل لكل تخفيف بالتالي يتحدد عدد الخلايا عند كل قراءة امتصاص للنوع البكتيري
المدروس ويصبح هذا منحي قياسي مرجعي بالنسبة له .
