الرئيسية
أحدث الصور
من طرف v طرق حفظ المزارع الميكروبية
(Maintenance of bacterial strains):
بعد عزل وتنقية البكتيريا, يتم حفظها بطرق مختلفة وذلك من أجل تعريفها أو استخدامها في الدراسات المختلفة لأغراض طبية,أو صناعية وغيرهما.
ويوجد العديد من طرق الحفظ التي تستخدم لحفظ البكتيريا لفترات قصيرة أو طويلة المدى..
أولا: طرق الحفظ لفترات قصيرة :
1) طريقة الحفظ باستخدام أنابيب الآجار المائل (Agar Slant):
هو عبارة عن أنبوبة اختبار ذات غطاء وتحتوى على بيئة اجار, وضعت على سطح مائل أثناء تبريدها لتجميد الاجار. إن محتويات الأنبوبة المعاملة بهذه الطريقة تتصلب مكونة سطحا مائلا من السهل تلقيحه بإبرة التلقيح المستقيمة أو ذات العقدة.
وتستخدم أنابيب الآجار المائل لحفظ البكتيريا بعد تلقيحها بالميكروب النقي وتحضينها عند درجة الحرارة المناسبة لمدة 24 ساعة, ثم تحفظ الأنابيب عند درجة حرارة 4مْ .
وتعتبر طريقة الآجار المائل(Agar Slant) التي تستخدم في زراعة الكائنات الدقيقة على المزارع الصلبة من الطرق الشائعة في حفظ المزارع الميكروبية.(Maintaining stock cultures)
v في التدريب التالي, سنقوم بتلقيح سطح الاجار المائل بالبكتيريا.
الأدوات المستخدمة:
أنابيب اجار مغذى, حمام مائي, إبرة تلقيح البكتيريا ذات العقدة, بكتيريا Escherichia coli, Micrococcus luteus .
طريقة العمل PROCEDURE :
1. اصهري ثلاث أنابيب اجار مغذى في حمام مائي على درجة حرارة 100مْ, ثم بردى الأنابيب على سطح مائل.
2. بعد تصلب الاجار, لقحي سطح اجار الأنبوبة الأولى ببكتيريا Escherichia coli باستخدام إبرة التلقيح. حركي الإبرة برفق على سطح الاجار من أسفل إلى أعلى. حاذري من الضغط على الإبرة حتى لا تجرحي الاجار أو تقطعيه.
3. بنفس الطريقة لقحي سطح الأنبوبة الثانية ببكتيريا Micrococcus luteus
4. اتركي الأنبوبة الثالثة بدون تلقيح للمقارنة.
5. تحضن الأنابيب الثلاثة على درجة حرارة 37مْ لمدة 24-48 ساعة.
ملاحظة:
افحصي النمو السطحي المتكون ولاحظي طريقة النمو السطحي للبكتيريا على البيئة الصلبة والتي تختلف تماما عن تلك النامية في المزرعة السائلة.
| <TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE> آجار مائل | <TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE> نمو بكتيري على أنبوبة الآجار المائل |
خطوات التلقيح على بيئة لأجار المائل | نمو فطرى على أنبوبة الآجار المائل <TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE> |
2) الحفظ باستخدام الجلسرولGlycerol :
يتم حفظ المزارع البكتيرية في محلول معقم من الجلسرين يتراوح تركيزه من 10-40%, عند درجة حرارة ( ــ 20مْ). وفى هذه الطريقة يتم تجميع النمو البكتيرى النقى بالإبرة المعقمة ثم يوضع في أنبوبة بها جلسرين معقم وبعض الحبيبات الزجاجية الصغيرة حتى تمنع تكون بلورات ثلجية أثناء الحفظ.
ثانيا: طرق الحفظ لفترات طويلة :
1) الحفظ باستخدام التجفيد Lypholization :
تتم عملية التجفيد باستخدام جهاز (Lypholizer) حيث يوضع الميكروب في أنابيب ذات فوهة كبيرة في الجهاز, ثم يتم سحب الماء تدريجيا تحت التبريد الشديد. في النهاية نحصل على الميكروب في صورة بودر.
2) الحفظ باستخدام النيتروجين السائلLiquid nitrogen :
يتم حفظ الميكروب النقي تحت النيتروجين السائل لمنع عملية التلوث, ومن ثم يتم الحفظ عند درجة حرارة( ــ 20مْ).
3) الحفظ باستخدام التربة المعقمةSterilized soil :
يمكن حفظ البكتيريا وخاصة التي تنمو في التربة باستخدام قليل من التربة المعقمة. وفى هذه الطريقة يؤخذ بواسطة الإبرة المعقمة النمو البكتيري النقي ويوضع في أنبوبة تحتوى على القليل من التربة المعقمة, حيث يتم الخلط جيدا تحت ظروف التعقيم ومن ثم الحفظ في درجة حرارة المعمل
