الرئيسية
أحدث الصور
من طرف أنواع البيئات الميكروبية
Culture Media for an organisms
البيئات(Media):
تستعمل في الميكروبيولوجى أنواع كثيرة من البيئات, تختلف حسب الاحتياجات الخاصة بالميكروبات.
تنقسم البيئات من حيث التركيب إلى قسمين:
1- البيئات الطبيعية غير محددة التركيب:
(Natural Media, Chemically nondefined media)
تتكون من مكونات غير محددة التركيب الكيماوي, مثل البيئات التي يدخل في تركيبها المواد اللازمة لنمو الميكروبات بشكلها الخام كمستخلص اللحم والدم أو سيرم الدم أو الببتون, أو مستخلص أو خلايا الخميرة والتي تحتوى على (فيتامينات,معادن,ببتيدات).
2- بيئات صناعية محددة ومعروفة التركيب: (Chemically Defined Media)
تتكون من مواد ذات تركيب كيماوي محدد. تحتوى البيئة على المواد اللازمة لنمو الميكروبات بصورة كيميائيات نقية وبتركيزات معروفة ومحددة, وتختلف هذه المواد المكونة للبيئة حسب الاحتياجات الغذائية للميكروب.
مثال: أملاح معدنية, جلوكوز, مصدر كربون, مصدر نيتروجين.
ويمكن تنقسم البيئات من حيث القوام إلى :
1- بيئات صلبة "طبيعية"Solid media
مثل شرائح البطاطس أو الجزر.
2- بيئات صلبة قابلة للإسالة Solid –reversible to liquid
مثل البيئات التي يدخل في تركيبها الآجار أو الجيلاتين ،وتستخدم لتمييز المستعمرات.
3- بيئات نصف صلبة Semisolid media
وهي التي تحتوي على كمية من الآجار لاتزيد عن ربع الكمية التي تضاف إلى البيئات الصلبة القابلة للإسالة.
4- بيئات سائلة Liquid media
مثل بيئة اللبن أو بيئة المرق المغذي، وتستخدم لتنمية الميكروبات المعزولة بصورة نقية.
بيئات معقمة جاهزة للاستخدام
تحضير البيئات المزرعية
Preparation of Growth Media
Preparation of Growth Media
أكثر البيئات المركبة (غير محددة التركيب) استعمالا لزراعة الكائنات الحية الدقيقة, هي بيئة البويون المغذى السائلة (Nutrient Broth) , والتي تحتوى على مستخلص اللحم (Beef Extract) والببتون.
يحضر مستخلص اللحم بغلي اللحم الأحمر المفروم الطازج في الماء ثم التبخير ليصبح عجينة. أما المكونات الأساسية فهي عبارة عن نواتج تحلل البروتين, قواعد عضوية, وفيتامينات، وأملاح معدنية.
وتقوم كثير من الشركات المتخصصة في توريد مستلزمات المعامل, بإعداد البيئة السائلة, المحتوية على 0.3% مستخلص لحم, 0.5% ببتون, وذلك في صورة مجففة (Dehydrated), حيث يضاف إليها الماء بكمية محددة عند عمل البيئة السائلة. أو يضاف إليها الماء والاتجار بنسبة 1.5-2% لتحضير البيئة الصلبة.
في مثل هذه البيئات المجففة (Dehydrated Media) يكون الرقم الايدروجينى بها مضبوط عادة عند PH= 7 لذلك إعادة ضبطه تصبح غير ضرورية.
درجة الـ PH :
هي مقياس عددي للتعبير عن درجة الحموضة أو القلوية للسوائل أو المحاليل المختلفة. وهذا القياس العددي يتراوح بين 1 إلى 14.
حيث إن قيمة PH =7 تمثل حالة التعادل, واقل من 7 تدل على زيادة الحموضة, وأعلى من 7 تدل على زيادة القلوية.
ومعظم البكتيريا تنمو جيدا عند درجة التعادل أو بالقرب منها.
v في هذا التدريب سنقوم بتحضير وتعقيم بيئة:
الآجار المغذى (Nutrient Agar).
الأدوات المستخدمة:
1000 مل ماء مقطر, بيئة البيون المغذى المجففة, دورق مخروطي سعته 250 مل, علبة تحتوى على الآجار في صورة بودر,ميزان حساس, حمام مائي, جهاز الاوتوكليف, أطباق بتري معقمة, لهب بنزن, قطن, مطهر كيميائي لتطهير البنش, قصدير أو غطاء بلاستيكي للدورق.
طريقة العمل PROCEDURE:
1. أضف 1000 مل ماء مقطر إلى دورق مخروطي سعته 1 لتر.
2. ثم اضيف 10 جم من بيئة البتون Peptone .
3. اضيفى أيضا 3جم من مستخلص اللحم Meat or Beef Extract Powder .
4. رجي الدورق برفق لإذابة المحتويات في الماء.
5. بعد المزج يضاف 20جم من الآجارAgar Powder وتمزج المكونات مرة أخرى.
6. قيسي درجة الـPH , وقومي بضبط الـ PHعند 7 تقريبا, ولرفع الـPH اضيفى قطرتين من هيدروكسيد الصوديوم NaoH, أما لخفض الـpH اضيفى قطرتين من حمض الهيدروكلوريك HCL .
7. ضعي البيئة في حمام مائي عند درجة حرارة 100مْ إلى أن تذوب جميع مكونات البيئة وتتجانس مع بعضها.
8. ضعي البيئة في فلاسكات وغطيها بسدادة قطنية وقطعة من القصدير.
9. ضعي البيئة في جهاز الاوتوكليف لتعقيمها على درجة حرارة 121مْ لمدة 15 دقيقة.
10. بعد التعقيم, يتم وضع الدورق في حمام مائي على درجة 45مْ لكي تبرد البيئة.
11. تصب البيئة تحت شروط التعقيم في أطباق بتري المعقمة, بمعدل 15مل تقريبا لكل طبق.
ü إذا تكونت فقاقيع على سطح الاجار في الطبق, يرفع الغطاء قليلا وباستعمال لهب بنزن مقلوب يمرر على السطح بسرعة لإزالة الفقاقيع.
12. تحضن الأطباق على درجة حرارة 37مْ لمدة 24 ساعة, ثم تفحص للتأكد من عملية التعقيم.
v بيئة المرق المغذى:
هي بيئة سائلة تحتوى نفس مكونات بيئة الآجار المغذى (NA) ولكن بدون إضافة الآجار.
<TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE>1- بيئات زراعية | <TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE>2 |
<TABLE cellSpacing=0 cellPadding=0 width="100%"> <TR> <td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8; BORDER-TOP: #ece9d8; BORDER-LEFT: #ece9d8; BORDER-BOTTOM: #ece9d8; BACKGROUND-COLOR: transparent"> </TD></TR></TABLE> 3 | |
الدرس العملي الرابع :
عزل الميكروبات المنتشرة في الطبيعة ونموها على البيئات المختلفة
Isolation of microorganisms from different sources
Isolation of microorganisms from different sources
مقدمة:-
توجد الميكروبات منتشرة في كل مكان تقريبا, ولكن تختلف كثافتها من وسط لآخر, إذ انه يجب أن يتوفر لكل ميكروب شروط خاصة لنموه: كنوع الغذاء, الرقم الايدروجينى, وجود الأكسجين أو عدمه.....الخ.
ونظرا لانتشارها في الطبيعة بدرجة كبيرة فانه يهتم بعمليات التعقيم عند القيام بالأعمال البكتريولوجية والطبية.
الهدف من التجربة :
انتشار الميكروبات في الطبيعة.
الأدوات والمواد المستخدمة:
أطباق بتري تحتوى على بيئة الآجار المغذى.
طريقة العمل PROCEDURE :
1. عرضي احد الأطباق للهواء الجوى برفع غطائه مدة 15 دقيقة ثم غطيه.
2. المسي بإصبعك سطح الآجار في الطبق الثاني ثم غطى الطبق.
3. خذي مسحة بواسطة (Cotton Swab) من الجسم أو من الطاولة أو الأرض ثم المسي به سطح الآجار وغطى الطبق بعد ذلك.
4. بواسطة إبرة تلقيح البكتيريا(Inoculating Loop) خذي من عينة اللبن ولقحي بطريقة التخطيط.
5. اتركي الطبق الأخير للمقارنة.
6. حضني الأطباق على 37مْ لمدة 48 ساعة.
7. افحصي الأطباق.
8. اكتبي تقريرا.
