الرئيسية
أحدث الصور
من طرف (COBAS AMPLIPREP – COBAS TAQMAN)
آخر ما توصل إليه العلم الحديث في تكنولوجيا فصل وتضخيم الحمض النووي من شركة روش دياجنوستكس الألمانية.
مواصفات النظام:-
• يتكون النظام من جهازي الكوباس تاكمان 48 والكوباس أمبليبريب يتحكم فيهما نظام حاسوب واحد (Data Station) .
• يمثل هذا النظام دائرة عمل متكاملة لفصل وتضخيم الحمض النووي وكذلك قياس نسبة تركيز الفيروس (Fully Automated System) .
• النظام من فئة ( .(Real Time
مميزات النظام:-
• سهولة الاستخدام بفضل نظام الحاسوب و نظام النافذة (Windows)
• يستطيع النظام فصل الحمض النووي لعدد 4 اختبارات مختلفة وذلك لعدد 72 عينه في أن واحد مما يزيد من إنتاجية النظام وكذلك مرونته.
• يستطيع هذا النظام استخلاص وتكبير جميع الأحماض النووية (DNA RNA , (في آن واحد.
• إمكانية تحميل النظام المستمرة بالعينات وكذلك رفع العينات المستخلصة أثناء التشغيل (Continuous Operation) مما يزيد من قدرة النظام الإنتاجية وبالتالي يلبي كافة احتياجات المختبر.
• بفضل الأشعة الفوق البنفسجية UV Light و النافذة المغلقة Automated Closed door فلا سبيل للتلوث من الوصول إلى العينات حتى مع التركيزات المنخفضة.
• يستخدم النظام أحدث تكنولوجيا في الاستخلاص والمسماة بالاستخلاص المغناطيسي باستخدام الكرات الممغنطة Magnetic Beads Technology وعليه تستخلص أنقى كمية من الحمض النووي.
• يستخدم النظام محاليل جاهزة للتشغيل ولا تحتاج للتحضير مما يقلل الوقت اللازم لتجهيز النظام للعمل.
• كل خطوات العمل تتم عن طريق النظام دون الحاجة لتدخل الأيدي باستثناء وضع المحاليل على الجهاز وكذلك رفعها مما يقلل خطر التلوث نتيجة التدخل البشري.
• يستخدم الجهاز أنابيب مغلقة سواء كان للعينات نفسها أو للعينات الناتجة مما يمنع خطر التلوث.
• يستخدم النظام أحدث تكنولوجيا لتضخيم الفيروس والتي تعتمد على قياس طاقة تردد الفلورسين المنبعث
Fluorescence Resonance Energy Transfer
والتي تمكن من الكشف المبكر عن كافة الأمراض الوبائية.
• النظام من فئة (Real Time)و بفضل هذه التكنولوجيا يمكنك أن ترى التفاعلات التي تمت بالجهاز على شاشة الحاسوب أثناء دورات التفاعل المتسلسلة.
• يستخدم الجهاز أحدث تكنولوجيا لقياس نسبة تركيز الفيروس (Kinetic PCR) مما يقلل من الزمن اللازم للحصول على النتائج ويعطى مدى قراءه كبير(Broad Dynamic Range).
• يستطيع النظام الكشف عن فيروسات الكبدي الوبائي ب وج و مرض نقص المناعة المكتسبة الإيدز والدرن وكثير من الفحوصات المهمة ويستطيع النظام أن يعطيك النتيجة الكمية (Quantification ) للتفاعل وكمية الفيروس التي نتجت من هذا التفاعل.
• يتميز النظام بأنه ذات حساسية عالية مما يمكنه من تشخيص الأمراض الڤيروسية في بدايتها.
أولاً : جهاز COBAS
AmpliPrep System
1. ينقسم الجهاز الى ثلاثة أجزاء رئيسية:- الغطاء الرئيسي ( Main cover) وجزء التحميل (Load panel) لوضع الكواشف والعينات وجزء الخدمة (Service panel ) وهو خاص بأعمال الصيانه.
2. جزء التحميل ( Load panel) يتكون من عدة ممرات طوليه الى الداخل
مرتبة من اليسار الى اليمين بترتيب الحروف الهجائية من A--------L)) ويتم ادخال الكواشف وأنابيب العينات الى الممرات محمله على حوامل خاصة بكل جزء:- K- Carrier)) حامل الأنابيب الخاصة بجهاز الكوباس تاكمان , (SPU rack) حامل الأنابيب الخاصة بإستخلاص الحمض النووى , (Sample rack) حامل الأنابيب الخاصة بالعينات , (Reagent rack) حامل الكواشف.
3. الممر (A) خاص بالكاشف CS1)) وذلك لأن الممرمثبت على حامل هزاز يعمل على تقليب وخلط الكاشف بصفة مستمرة حيث أنه يحتوي على كرات زجاجية ممغنطة سريعة الترسب .
4. الممرات (B-C-D-E) خاصة بالكواشف CS2. CS3. CS4.)) حيث يمكن الجمع بينهم على حامل واحد أو وضع كل منهما على حده .
5. الممرات (F.G.H) خاصة بحوامل أنابيب العينات (Sample rack).
6. الممرات (J.K.L) خاصة بحوامل أنابيب إستخلاص الحمض النووى (SPU rack) وهي منطقة التحضين.
7. الممرات (M.N.O.P) خاصة بحامل ال K tips) ) التي يؤخذ بها الحامض النووي المستخلص في النهاية ويوضع مع مخلوط السيادة )مزيج التكبير) بداخل أنابيب جهاز الكوباس تاكمان ((K tube.
8. يحتوي الجهاز على 3 ممرات خاصة بالعينات مرمزه يستوعب كل منها 24 عينه وذلك يسمح بتحميل 72 عينة فى أن واحد.
9. السيطرة الداخليه التي تسمح بمتابعة خطوات الاختبار خطوه خطوه.
الكواشـــف
1. يمكن تحميل الكواشف على الجهاز وهو مستمر بالعمل بدون توقف .
2. الكواشف الخاصه بالجهاز (CS1,CS2,CS3,CS4) مزوده بشريط مرمز ومغطاة باحكام حتى تمنع التسرب , وتوضع على كاسيتات للمحافظه على الاستقرار والثبات وتكون متجهه الى اليمين حتى تقرأ عدسة الجهاز رقم الرمز الخاص بكل كاشف.
3. تمنع الأشعة الفوق بنفسجية ( UV) وكذلك إستخدام أنابيب مغلقة سواء كان للعينات نفسها أو للعينات الناتجة خطر انتشار التلوث .
4. يمنع الجهاز حدوث أخطاء التحضير اليدوي وذلك لأن الكواشف الخاصه به جاهزة للاستعمال و تبدأ بالعمل بمجرد ادخالها في الممرات الخاصة بها (A.B.C.D.E.) .
صيانة الجهاز
تتم عملية الصيانة اليومية ( Daily maintenance ) قبل بدء العمل حيث تستغرق العملية حوالي 7 دقائق وفيها :-
1. يتم أولا التأكد من أن كمية محلول الغسيل Washing Buffer كافية للقيام بالعمل ويفضل تحميل عدد 2جالون لضمان إستمرارية العمل (Continuous Operation) .
2. يتم التأكد من أن حاوية النفايات السائلة (Waste) نظيفة وخاليه من أي بقايا قبل بدء العمل وعند تنظيف الحاويه يجب أن تنظف باستخدام الماء المقطر فقط حيث أنها لا تحتوى على مواد بيولوجية خطرة والتى يتم التحفظ عليها كليا فى الأنابيب الخاصة بإستخلاص الحمض النووى .
3. التأكد من أن المحقنتين خاليتين من الانسدادات وفقاعات الهواء.
طريقة تشغيل جهاز COBAS AmpliPrep System
1. افتح الكمبيوتر وأدخل اسم المستخدم والرقم السري ثم اختار برنامج (Amplilink) .
2. افتح زر الجهازين من الكمبيوتر وانتظر حتى تصبح جميع اللمبات خضراء مما يشير الى أن الجهاز مستعد للعمل.
3. أخرج العينات من الفريزر واتركها في درجة حرارة الغرفة قبل بداية العمل بنصف ساعة حتى تتحول للحالة السائلة .
4. أخرج الكواشف من الثلاجه قبل بداية العمل بنصف ساعة وضعها مباشرة على حوامل الكواشف وأدخلها في الممرات الخاصة بالكواشف في الجهاز حتى لا تتأثر بالرطوبة بعد خروجها من الثلاجة وتتلف مع مراعاة أن تكون الجهة المرمزه من الكاشف باتجاه اليمين حتى تتمكن عدسة الجهاز من التعرف عليها.
5. إملء الحوامل الخاصة بالمستهلكات كما يلى :-
- S tube Racks)) بالكلبسات والأنابيب الخاصة بالعينات وأيضا الكلبسات الخاصة بكل كونترول (السالبة/ايجابية منخفضة/ايجابية عالية) فى الممرات (F.G.H) .
- K Tips) ) فى الممرات (M.N.O.P) .
- (SPU racks) فى الممرات (J.K.L) مع مراعاة وضع الأنابيب باتجاه السهم فى أقصى اليمين ونزع الشريط الأزرق من الجانبين وعدم الضغط على الأنابيب من جهة واحده بقوة بل ضغط خفيف متوازن على الجهتين ثم يتم إدخاله بداخل الممرات الخاصة به داخل الجهاز مع مراعاة إدخاله بسرعة عند إحساس الجهاز به .
6. يتم التأكد من أن الجهاز مستعد للعمل باختيار ( (SYSTEMمن رأس الشاشة وأن كل شئ ( OK ).
7. يبرمج الجهاز باختيار ( SAMPEL RACK ) وبالضغط على أيقونة طلب ( Order) ثم أيقونة جديد ((New ثم يدخل رقم الحامل ويتم تحديد أماكن العينات والكنترول السالب و الايجابي المنخفض والايجابي المرتفع ونوع الإختبار كما يمكن وضع تعليق يوضح اسم القائم بالاختبار أو أى معلومات أخرى .
8. يجب مراعاة استخدام الكنترولات الخاصة بنفس الكاشف أو نفس رقم رمز التعريف للكاشف ( Lot number) .
9. تبرمج العينات حسب كتابتها في ورقة العمل وبعد إدخال جميع العينات والكنترولات يضغط على أيقونة الحفظ من أسفل الشاشة ( إذا حدث خطأ أثناء إدخال المعلومات يلغى ويصحح قبل الحفظ وذلك لأن الجهاز لا يسمح بالتعديل بعد الحفظ ) .
10. يمكن إضافة عينات جديدة لنفس الاختبار (أو أى إختبار أخر تم وضع محاليله على الجهاز) مع إضافة كونترولات جديدة معها وذلك على حامل عينات أخر .
11. بعد ذلك يتم التأكد من خلال كمبيوتر الجهاز على الكواشف والمستهلكات .
12. يتم التأكد من أن جميع العينات فى صورة جيدة مع مراعاة مزج العينات جيدا بواسطة Vortex)) عينة عينة يتبعها سنترفيوج للحظة لإزالة القطرات من الغطاء منعا للتلوث قبل بدء عملية وضع العينات فى الأنابيب الخاصة بها على الجهاز (Input S Tubes) .
13. يتم وضع العينات داخل كبينة السلامة بحيث يوضع في كل أنبوبة 1050 ميكرون من العينة بدقة شديدة و الانتظار لثواني بعد الشفط داخل البلازما لمنع شفط الهواء لأنه عند نقص العينة يرفضها الجهاز .
14. يراعى تفريغ العينة ببطء بدون فقاعات هواء حتى لا يتوقف الجهاز وتغلق الأنبوبة بعد ذلك .
15. يدخل حامل العينات (Sample rack) الى داخل الجهاز مباشرة بعد إحساس الجهاز بوجوده .
16. يتم التأكد من عدم وجود أى رسالة تحذيرية على الصفحة الرئيسة لكمبيوتر الجهاز وذلك بعد وضع العينات على الجهاز .
17. اضغط على أيقونة ( (Startمن الكومبيوتر حتى يبدأ الجهاز بالعمل.
طريقة تشغيل جهاز Taqman Cobas
1. يفتح الجهاز من الزر الجانبي عند فتح جهاز (AmpliPrep)
2. يتم الذهاب لجهاز( (TaqMan من الكومبيوتر واختياره بالتظليل عليه فيظهر الجهاز على شاشة الكومبيوتر .
3. يتم طلب عمل الصيانة الأسبوعية بتنظيف الأسطح وحوامل الــ K carrier ثم يضغط على زر الانتهاء finish)) .
4. عند انتهاء جهاز ((AmpliPrep من إستخلاص الحمض النووى وإخراج الــ ((K carrier من الجهاز بإستخدام الحامل الخاص بها, يتم إستخدام الناقلة الخاصة لنقل الــ ((K carrier بحرص تام الى أى من دواليب العمل الخاصة بجهاز التاكمان بعد فتح غطاءها الداخلى بالضغط على
( ( Openويجب التأكد من تعرف الجهازعلى الرمز الخاص بال
(K carrier) وذلك من خلال سماع صوت قراءة الرمز.
5. يجب أن تظهر على الشاشة شكل الــ (K Carrier)وأرقام الأنابيب عليها .
6. بالضغط على (close)يتم غلق الباب الداخلي ثم نغلق الباب الخارجي لجهاز (TaqMan)ثم نضغط على بدء التشغيل (Start) .
7. بعد انتهاء عمل الجهاز تظهر النتائج على شاشة النتائج فنقوم بالضغط على (Accept) لقبولها وطباعتها وإذا لم تقبل النتائج فلن يقوم الجهاز باستقبال ال (K Carrier) مرة أخرى .
8. بحرص شديد أخرج (K Carrier) الساخن من الجهاز ثم أغلق الغطاء ثم أغلق الكمبيوتر .
سير العينة بداخل الجهاز :
1. يقوم الجهاز بوضع 50 µl من كل من الكونترول الداخلي (Internal control) والإنزيم الخاص بعملية الإستخلاص (Protease) داخل الأنبوب الأيمن من ال SPU tube)) الخاص بالإختبار.
2. يقوم الجهاز بنقل ال S - tube)) إلى المكان المخصص بها على ال
SPU Rack)) .
3. يقوم الجهاز بنقل 850 µl من العينه داخل الأنبوب الأيمن من الـ (SPU الخاصة بها .
4. يقوم الجهاز بوضع 100 µl من كل من المحلول الخاص بإنحلال البروتين (Lysis Buffer) والكرات الزجاجية الممغنطة (MGP) داخل الأنبوب الأيمن من ال SPU tube)) الخاص بالإختبار ثم يتم عمل خلط لكل محتويات المحلول.
5. يتم تحضين الأنابيب عند 37م لمدة 5 دقائق مما يعمل على تكسير بروتينات الجدار وخروج الحامض النووي الذي يرتبط بالكرات الزجاجية الممغنطة .
6. بعد ذلك تحدث عملية التنقية حيث يقوم الجهاز بنقل SPU tube)) الخاص بكل عينة إلى منطقة الفصل ( (Separation areaوهي عبارة عن خمسة أماكن لخمسة SPU tube)) الاربعة أماكن الداخلية محاطة بمغناطيس يتسبب في امساك الحامض النووي بالجدار أثناء عملية الغسيل والتنقية والتى فيها يقوم الجهاز بشطف الحمض النووى وذلك بضخ 2800µl مرتين وفى كل مرة مع تحريك المغناطيس حول ال SPU tube)) لزيادة كفاءة عملية التنقية .
7. بعد ذلك وفي منطقة تحرير الحامض النووي (Target release area) عند درجة 80º م يقوم الجهاز بوضع 65 µl من ال (Elution buffer) على العينة لكي ينفصل ال Complex)) عن بعضه البعض .
8. تؤخذ ال SPU tube)) للمنطقة الاولى الخاليه من المغناطيس فى منطقة الفصل ( (Separation area ويترك SPU tube)) هناك حتى تنخفض درجة الحرارة .
9. يقوم الجهاز بوضع 50 µl من كل من مخلوط السيادة )مزيج التكبير) وأيون المنجنيز بداخل الأنبوبة الخاصة بجهاز الكوباس تاكمان
((K tube ثم يضع عليها الحمض النووى المستخلص وذلك بإستخدام ال
(K Tip) ثم يضعها في مكانها المخصص على ( (K Carrier
آخر ما توصل إليه العلم الحديث في تكنولوجيا فصل وتضخيم الحمض النووي من شركة روش دياجنوستكس الألمانية.
مواصفات النظام:-
• يتكون النظام من جهازي الكوباس تاكمان 48 والكوباس أمبليبريب يتحكم فيهما نظام حاسوب واحد (Data Station) .
• يمثل هذا النظام دائرة عمل متكاملة لفصل وتضخيم الحمض النووي وكذلك قياس نسبة تركيز الفيروس (Fully Automated System) .
• النظام من فئة ( .(Real Time
مميزات النظام:-
• سهولة الاستخدام بفضل نظام الحاسوب و نظام النافذة (Windows)
• يستطيع النظام فصل الحمض النووي لعدد 4 اختبارات مختلفة وذلك لعدد 72 عينه في أن واحد مما يزيد من إنتاجية النظام وكذلك مرونته.
• يستطيع هذا النظام استخلاص وتكبير جميع الأحماض النووية (DNA RNA , (في آن واحد.
• إمكانية تحميل النظام المستمرة بالعينات وكذلك رفع العينات المستخلصة أثناء التشغيل (Continuous Operation) مما يزيد من قدرة النظام الإنتاجية وبالتالي يلبي كافة احتياجات المختبر.
• بفضل الأشعة الفوق البنفسجية UV Light و النافذة المغلقة Automated Closed door فلا سبيل للتلوث من الوصول إلى العينات حتى مع التركيزات المنخفضة.
• يستخدم النظام أحدث تكنولوجيا في الاستخلاص والمسماة بالاستخلاص المغناطيسي باستخدام الكرات الممغنطة Magnetic Beads Technology وعليه تستخلص أنقى كمية من الحمض النووي.
• يستخدم النظام محاليل جاهزة للتشغيل ولا تحتاج للتحضير مما يقلل الوقت اللازم لتجهيز النظام للعمل.
• كل خطوات العمل تتم عن طريق النظام دون الحاجة لتدخل الأيدي باستثناء وضع المحاليل على الجهاز وكذلك رفعها مما يقلل خطر التلوث نتيجة التدخل البشري.
• يستخدم الجهاز أنابيب مغلقة سواء كان للعينات نفسها أو للعينات الناتجة مما يمنع خطر التلوث.
• يستخدم النظام أحدث تكنولوجيا لتضخيم الفيروس والتي تعتمد على قياس طاقة تردد الفلورسين المنبعث
Fluorescence Resonance Energy Transfer
والتي تمكن من الكشف المبكر عن كافة الأمراض الوبائية.
• النظام من فئة (Real Time)و بفضل هذه التكنولوجيا يمكنك أن ترى التفاعلات التي تمت بالجهاز على شاشة الحاسوب أثناء دورات التفاعل المتسلسلة.
• يستخدم الجهاز أحدث تكنولوجيا لقياس نسبة تركيز الفيروس (Kinetic PCR) مما يقلل من الزمن اللازم للحصول على النتائج ويعطى مدى قراءه كبير(Broad Dynamic Range).
• يستطيع النظام الكشف عن فيروسات الكبدي الوبائي ب وج و مرض نقص المناعة المكتسبة الإيدز والدرن وكثير من الفحوصات المهمة ويستطيع النظام أن يعطيك النتيجة الكمية (Quantification ) للتفاعل وكمية الفيروس التي نتجت من هذا التفاعل.
• يتميز النظام بأنه ذات حساسية عالية مما يمكنه من تشخيص الأمراض الڤيروسية في بدايتها.
أولاً : جهاز COBAS
AmpliPrep System1. ينقسم الجهاز الى ثلاثة أجزاء رئيسية:- الغطاء الرئيسي ( Main cover) وجزء التحميل (Load panel) لوضع الكواشف والعينات وجزء الخدمة (Service panel ) وهو خاص بأعمال الصيانه.
2. جزء التحميل ( Load panel) يتكون من عدة ممرات طوليه الى الداخل
مرتبة من اليسار الى اليمين بترتيب الحروف الهجائية من A--------L)) ويتم ادخال الكواشف وأنابيب العينات الى الممرات محمله على حوامل خاصة بكل جزء:- K- Carrier)) حامل الأنابيب الخاصة بجهاز الكوباس تاكمان , (SPU rack) حامل الأنابيب الخاصة بإستخلاص الحمض النووى , (Sample rack) حامل الأنابيب الخاصة بالعينات , (Reagent rack) حامل الكواشف.
3. الممر (A) خاص بالكاشف CS1)) وذلك لأن الممرمثبت على حامل هزاز يعمل على تقليب وخلط الكاشف بصفة مستمرة حيث أنه يحتوي على كرات زجاجية ممغنطة سريعة الترسب .
4. الممرات (B-C-D-E) خاصة بالكواشف CS2. CS3. CS4.)) حيث يمكن الجمع بينهم على حامل واحد أو وضع كل منهما على حده .
5. الممرات (F.G.H) خاصة بحوامل أنابيب العينات (Sample rack).
6. الممرات (J.K.L) خاصة بحوامل أنابيب إستخلاص الحمض النووى (SPU rack) وهي منطقة التحضين.
7. الممرات (M.N.O.P) خاصة بحامل ال K tips) ) التي يؤخذ بها الحامض النووي المستخلص في النهاية ويوضع مع مخلوط السيادة )مزيج التكبير) بداخل أنابيب جهاز الكوباس تاكمان ((K tube.
8. يحتوي الجهاز على 3 ممرات خاصة بالعينات مرمزه يستوعب كل منها 24 عينه وذلك يسمح بتحميل 72 عينة فى أن واحد.
9. السيطرة الداخليه التي تسمح بمتابعة خطوات الاختبار خطوه خطوه.
الكواشـــف
1. يمكن تحميل الكواشف على الجهاز وهو مستمر بالعمل بدون توقف .
2. الكواشف الخاصه بالجهاز (CS1,CS2,CS3,CS4) مزوده بشريط مرمز ومغطاة باحكام حتى تمنع التسرب , وتوضع على كاسيتات للمحافظه على الاستقرار والثبات وتكون متجهه الى اليمين حتى تقرأ عدسة الجهاز رقم الرمز الخاص بكل كاشف.
3. تمنع الأشعة الفوق بنفسجية ( UV) وكذلك إستخدام أنابيب مغلقة سواء كان للعينات نفسها أو للعينات الناتجة خطر انتشار التلوث .
4. يمنع الجهاز حدوث أخطاء التحضير اليدوي وذلك لأن الكواشف الخاصه به جاهزة للاستعمال و تبدأ بالعمل بمجرد ادخالها في الممرات الخاصة بها (A.B.C.D.E.) .
صيانة الجهاز
تتم عملية الصيانة اليومية ( Daily maintenance ) قبل بدء العمل حيث تستغرق العملية حوالي 7 دقائق وفيها :-
1. يتم أولا التأكد من أن كمية محلول الغسيل Washing Buffer كافية للقيام بالعمل ويفضل تحميل عدد 2جالون لضمان إستمرارية العمل (Continuous Operation) .
2. يتم التأكد من أن حاوية النفايات السائلة (Waste) نظيفة وخاليه من أي بقايا قبل بدء العمل وعند تنظيف الحاويه يجب أن تنظف باستخدام الماء المقطر فقط حيث أنها لا تحتوى على مواد بيولوجية خطرة والتى يتم التحفظ عليها كليا فى الأنابيب الخاصة بإستخلاص الحمض النووى .
3. التأكد من أن المحقنتين خاليتين من الانسدادات وفقاعات الهواء.
طريقة تشغيل جهاز COBAS
AmpliPrep System1. افتح الكمبيوتر وأدخل اسم المستخدم والرقم السري ثم اختار برنامج (Amplilink) .
2. افتح زر الجهازين من الكمبيوتر وانتظر حتى تصبح جميع اللمبات خضراء مما يشير الى أن الجهاز مستعد للعمل.
3. أخرج العينات من الفريزر واتركها في درجة حرارة الغرفة قبل بداية العمل بنصف ساعة حتى تتحول للحالة السائلة .
4. أخرج الكواشف من الثلاجه قبل بداية العمل بنصف ساعة وضعها مباشرة على حوامل الكواشف وأدخلها في الممرات الخاصة بالكواشف في الجهاز حتى لا تتأثر بالرطوبة بعد خروجها من الثلاجة وتتلف مع مراعاة أن تكون الجهة المرمزه من الكاشف باتجاه اليمين حتى تتمكن عدسة الجهاز من التعرف عليها.
5. إملء الحوامل الخاصة بالمستهلكات كما يلى :-
- S tube Racks)) بالكلبسات والأنابيب الخاصة بالعينات وأيضا الكلبسات الخاصة بكل كونترول (السالبة/ايجابية منخفضة/ايجابية عالية) فى الممرات (F.G.H) .
- K Tips) ) فى الممرات (M.N.O.P) .
- (SPU racks) فى الممرات (J.K.L) مع مراعاة وضع الأنابيب باتجاه السهم فى أقصى اليمين ونزع الشريط الأزرق من الجانبين وعدم الضغط على الأنابيب من جهة واحده بقوة بل ضغط خفيف متوازن على الجهتين ثم يتم إدخاله بداخل الممرات الخاصة به داخل الجهاز مع مراعاة إدخاله بسرعة عند إحساس الجهاز به .
6. يتم التأكد من أن الجهاز مستعد للعمل باختيار ( (SYSTEMمن رأس الشاشة وأن كل شئ ( OK ).
7. يبرمج الجهاز باختيار ( SAMPEL RACK ) وبالضغط على أيقونة طلب ( Order) ثم أيقونة جديد ((New ثم يدخل رقم الحامل ويتم تحديد أماكن العينات والكنترول السالب و الايجابي المنخفض والايجابي المرتفع ونوع الإختبار كما يمكن وضع تعليق يوضح اسم القائم بالاختبار أو أى معلومات أخرى .
8. يجب مراعاة استخدام الكنترولات الخاصة بنفس الكاشف أو نفس رقم رمز التعريف للكاشف ( Lot number) .
9. تبرمج العينات حسب كتابتها في ورقة العمل وبعد إدخال جميع العينات والكنترولات يضغط على أيقونة الحفظ من أسفل الشاشة ( إذا حدث خطأ أثناء إدخال المعلومات يلغى ويصحح قبل الحفظ وذلك لأن الجهاز لا يسمح بالتعديل بعد الحفظ ) .
10. يمكن إضافة عينات جديدة لنفس الاختبار (أو أى إختبار أخر تم وضع محاليله على الجهاز) مع إضافة كونترولات جديدة معها وذلك على حامل عينات أخر .
11. بعد ذلك يتم التأكد من خلال كمبيوتر الجهاز على الكواشف والمستهلكات .
12. يتم التأكد من أن جميع العينات فى صورة جيدة مع مراعاة مزج العينات جيدا بواسطة Vortex)) عينة عينة يتبعها سنترفيوج للحظة لإزالة القطرات من الغطاء منعا للتلوث قبل بدء عملية وضع العينات فى الأنابيب الخاصة بها على الجهاز (Input S Tubes) .
13. يتم وضع العينات داخل كبينة السلامة بحيث يوضع في كل أنبوبة 1050 ميكرون من العينة بدقة شديدة و الانتظار لثواني بعد الشفط داخل البلازما لمنع شفط الهواء لأنه عند نقص العينة يرفضها الجهاز .
14. يراعى تفريغ العينة ببطء بدون فقاعات هواء حتى لا يتوقف الجهاز وتغلق الأنبوبة بعد ذلك .
15. يدخل حامل العينات (Sample rack) الى داخل الجهاز مباشرة بعد إحساس الجهاز بوجوده .
16. يتم التأكد من عدم وجود أى رسالة تحذيرية على الصفحة الرئيسة لكمبيوتر الجهاز وذلك بعد وضع العينات على الجهاز .
17. اضغط على أيقونة ( (Startمن الكومبيوتر حتى يبدأ الجهاز بالعمل.
طريقة تشغيل جهاز Taqman Cobas
1. يفتح الجهاز من الزر الجانبي عند فتح جهاز (AmpliPrep)
2. يتم الذهاب لجهاز( (TaqMan من الكومبيوتر واختياره بالتظليل عليه فيظهر الجهاز على شاشة الكومبيوتر .
3. يتم طلب عمل الصيانة الأسبوعية بتنظيف الأسطح وحوامل الــ K carrier ثم يضغط على زر الانتهاء finish)) .
4. عند انتهاء جهاز ((AmpliPrep من إستخلاص الحمض النووى وإخراج الــ ((K carrier من الجهاز بإستخدام الحامل الخاص بها, يتم إستخدام الناقلة الخاصة لنقل الــ ((K carrier بحرص تام الى أى من دواليب العمل الخاصة بجهاز التاكمان بعد فتح غطاءها الداخلى بالضغط على
( ( Openويجب التأكد من تعرف الجهازعلى الرمز الخاص بال
(K carrier) وذلك من خلال سماع صوت قراءة الرمز.
5. يجب أن تظهر على الشاشة شكل الــ (K Carrier)وأرقام الأنابيب عليها .
6. بالضغط على (close)يتم غلق الباب الداخلي ثم نغلق الباب الخارجي لجهاز (TaqMan)ثم نضغط على بدء التشغيل (Start) .
7. بعد انتهاء عمل الجهاز تظهر النتائج على شاشة النتائج فنقوم بالضغط على (Accept) لقبولها وطباعتها وإذا لم تقبل النتائج فلن يقوم الجهاز باستقبال ال (K Carrier) مرة أخرى .
8. بحرص شديد أخرج (K Carrier) الساخن من الجهاز ثم أغلق الغطاء ثم أغلق الكمبيوتر .
سير العينة بداخل الجهاز :
1. يقوم الجهاز بوضع 50 µl من كل من الكونترول الداخلي (Internal control) والإنزيم الخاص بعملية الإستخلاص (Protease) داخل الأنبوب الأيمن من ال SPU tube)) الخاص بالإختبار.
2. يقوم الجهاز بنقل ال S - tube)) إلى المكان المخصص بها على ال
SPU Rack)) .
3. يقوم الجهاز بنقل 850 µl من العينه داخل الأنبوب الأيمن من الـ (SPU الخاصة بها .
4. يقوم الجهاز بوضع 100 µl من كل من المحلول الخاص بإنحلال البروتين (Lysis Buffer) والكرات الزجاجية الممغنطة (MGP) داخل الأنبوب الأيمن من ال SPU tube)) الخاص بالإختبار ثم يتم عمل خلط لكل محتويات المحلول.
5. يتم تحضين الأنابيب عند 37م لمدة 5 دقائق مما يعمل على تكسير بروتينات الجدار وخروج الحامض النووي الذي يرتبط بالكرات الزجاجية الممغنطة .
6. بعد ذلك تحدث عملية التنقية حيث يقوم الجهاز بنقل SPU tube)) الخاص بكل عينة إلى منطقة الفصل ( (Separation areaوهي عبارة عن خمسة أماكن لخمسة SPU tube)) الاربعة أماكن الداخلية محاطة بمغناطيس يتسبب في امساك الحامض النووي بالجدار أثناء عملية الغسيل والتنقية والتى فيها يقوم الجهاز بشطف الحمض النووى وذلك بضخ 2800µl مرتين وفى كل مرة مع تحريك المغناطيس حول ال SPU tube)) لزيادة كفاءة عملية التنقية .
7. بعد ذلك وفي منطقة تحرير الحامض النووي (Target release area) عند درجة 80º م يقوم الجهاز بوضع 65 µl من ال (Elution buffer) على العينة لكي ينفصل ال Complex)) عن بعضه البعض .
8. تؤخذ ال SPU tube)) للمنطقة الاولى الخاليه من المغناطيس فى منطقة الفصل ( (Separation area ويترك SPU tube)) هناك حتى تنخفض درجة الحرارة .
9. يقوم الجهاز بوضع 50 µl من كل من مخلوط السيادة )مزيج التكبير) وأيون المنجنيز بداخل الأنبوبة الخاصة بجهاز الكوباس تاكمان
((K tube ثم يضع عليها الحمض النووى المستخلص وذلك بإستخدام ال
(K Tip) ثم يضعها في مكانها المخصص على ( (K Carrier
